Стандартные FLIM системы для микроскопов

Методы флуоресцентной микроскопии давно заняли важное место среди технологий исследования биологических объектов. Для работы с клетками и тканями применяются разнообразные флуоресцентные метки, кроме того, в биологическом материале присутствуют разнообразные эндогенные флуорохромы. Помимо спектра и интенсивности флуорохромы характеризуются длительностью жизни флуоресценции. Микроскопия визуализации времени жизни флуоресценции (fluorescence-lifetime imaging microscopy, FLIM) оценивает пространственное распределение флуоресцентных меток с учётом длительности жизни флуоресценции. Метод FLIM позволяет различать флуоресценцию, исходящую от различных флуорохромов, и аутофлуоресценцию молекул образца, даже если они имеют схожий спектр излучения. FLIM применяется для изучения пространственных и временных белок-белковых взаимодействий, свойств мембран и взаимодействий с нуклеиновыми кислотами в живых клетках. Метод FLIM также можно применять для получения информации об окружении флуорофора на основе изменения его времени жизни.

Системы FLIM собираются, как правило, на основе конфокальных и мультифотонных микроскопов, а также на флуоресцентных микроскопах широкого поля. Сканирующие микроскопы обеспечивают более высокое разрешение, с другой стороны, в эпифлуоресцентном режиме данные по всем наблюдаемым областям собираются единовременно. Время жизни флуорохромов, используемых в качестве меток, длится 10^-9 -10^-6 секунд. Это определяет требования к детекторам, используемым для FLIM, поскольку требуется очень быстрое получение изображений. Мультиканальные фотоумножители, лавинные фотодиоды, высокоскоростные фоторегистраторы с синхронизированной развёрткой и камеры ПЗС с захватом изображения 200 пс могут использоваться для этих целей. 

Стандартная конфигурация FLIM системы для микроскопов традиционно состоит из настольной TCSPC системы для счета фотонов серии Simple-Tau, которая может работать в одноканальном, двухканальном или четырехканальном режиме конфокального FLIM, многофотонного FLIM, NDD FLIM, многоспектрального FLIM, флуоресцентной корреляционной спектроскопии (FCS). В качестве детекторов для FLIM систем используются гибридные детекторы серии HPM-100 или SPAD модули для счета фотонов, обладающие высокой скоростью счета, быстрым откликом, отсутствием послеимпульсов и диффузионного хвоста. Также возможно применение 16-канальных многоволновых детекторов серии MW FLIM, которые регистрируют фотоны одновременно в 16 спектральных каналах. В качестве источников излучения рекомендуется использовать пикосекундные диодные лазеры с длиной волны излучения 405 нм, 445 нм, 473 нм, 488 нм, 640 нм способные работать в импульсном или непрерывном режиме.

Особенности:

- подходит для всех типов микроскопов;

- конфокальный FLIM (визуализации времени затухания флуоресценции);

- TCSPC система, построенная на одном детекторе;

- параллельная TCSPC система, построенная на двух детекторах;

- многоспектральная FLIM система;

- высокая скорость счета;

- одновременная регистрация фотонов во всех спектральных диапазонах;

- короткое время опроса;

- режим записи временных отметок и гистограммы;

- флуоресцентная корреляционная спектроскопия (FCS), корректировка и настройка в реальном времени;

- большой размер изображений в режиме FIFO;

- быстрый просмотр изображений во всех FLIM режимах.

Технические параметры стандартных FLIM систем компании Becker&Hickl: