Флуорофоры и оптические фильтры для флуоресцентной микроскопии. Обзор Edmund Optics
Флуоресцентная микроскопия – это метод микроскопии, который использует флуоресценцию, индуцируемую в флуорофорах. Флуорофор – это флуоресцентный краситель, используемый для мечения белков, тканей и клеток для исследования с помощью флуоресцентной микроскопии. Флуорофор поглощает энергию определенных длин волн (диапазон возбуждения), и переизлучает эту энергию в другой определенной области длин волн, называемой диапазоном эмиссии.
Системы флуоресцентной микроскопии, такие как эпифлуоресцентный микроскоп, могут быть простыми, в то время как конфокальные или многофотонные системы могут быть очень сложными. Однако все флуоресцентные микроскопы разделяют одну и ту же основную концепцию: энергия возбуждения освещает образец, который выделяет слабую, но поддающуюся количественной оценке энергию излучения. Длины волн возбуждения и эмиссии разные. Это позволяет специализированным фильтрам увеличить общую контрастность и сигнал.
Типичная установка флуоресцентного микроскопа. Система фильтров состоит из трех типов фильтров: фильтра возбуждения, дихроичного фильтра и фильтра эмиссии.
Фильтр №1: Фильтр возбуждения
Фильтр возбуждения помещается на пути освещения флуоресцентного микроскопа и отфильтровывает все длины волн источника света, за исключением диапазона возбуждения флуорофора. Минимальное пропускание фильтра определяет яркость изображений. Для фильтра возбуждения рекомендуется пропускание >85% (минимум – 40%). Полоса пропускания фильтра возбуждения должна полностью находиться в диапазоне возбуждения флуорофора таким образом, чтобы центральная длина волны (CWL) фильтра была как можно ближе к пиковой длине волны возбуждения флуорофора. Оптическая плотность фильтра возбуждения (OD) определяет темноту фонового изображения; OD – это мера того, насколько хорошо фильтр блокирует длины волн за пределами диапазона передачи или полосы пропускания. Рекомендуется OD 6 и более (минимум – OD 3).
Фильтр №2: Дихроичный фильтр или светоделитель
Дихроичный фильтр расположен между фильтром возбуждения и эмиссионным фильтром под углом 45°, он отражает сигнал возбуждения флуоресценции в сторону флуорофора и пропускает сигнал излучения от образца к детектору. Идеальные дихроичные фильтры имеют резкий переход между максимальным отражением (>95% для полосы пропускания) и максимальным пропусканием (>90% для полосы пропускания). Выберите фильтр с учетом длины волны флуорофора, чтобы минимизировать рассеянный свет и максимизировать отношение сигнала флуоресцентного изображения к шуму.
Фильтр №3: Эмиссионный фильтр
Эмиссионный фильтр отфильтровывает диапазон возбуждения флуорофора и пропускает диапазон излучения. Те же рекомендации для фильтров возбуждения справедливы и для эмиссионных фильтров: минимальная полоса пропускания, OD и CWL. Эмиссионный фильтр с идеальной комбинацией CWL, минимальной полосой пропускания и OD обеспечивает максимально яркие изображения и обеспечивает обнаружение самых слабых сигналов излучения.
Обобщенная спектральная кривая флуорофора
На рисунке показан типичный профиль возбуждения и эмиссии. Профили поглощения и излучения имеют общие длины волн, что является одной из причин, по которой необходимы высококачественные фильтры с высокой пропускаемостью, узкой полосой, высокой оптической плотностью и резкими переходами между пропусканием и поглощением. Использование фильтров низкого качества может в конечном итоге повредить образец, или дорогостоящие датчики.
Edmund Optics предлагает десятки имеющихся в наличии и готовых к отправке оптических фильтров, которые подходят для областей возбуждения и излучения каждого указанного флуорофора. Для применения в флуоресцентной микроскопии с использованием нескольких флуорофоров, лазерных источников, альтернативных дихроичных фильтров или светоделителей, а также для других применений.
Параметры оптических фильтров:
|
Артикул |
Диаметр (мм) |
CWL (нм) |
Совместимый флуорофор |
Ширина полосы (нм) |
|
84-076 |
12.5 |
340.00 |
FURA2 Excitation |
26.00 |
|
84-092 |
25 |
340.00 |
FURA2 Excitation |
26.00 |
|
84-108 |
50 |
340.00 |
FURA2 Excitation |
26.00 |
|
86-973 |
12.5 |
357.00 |
Tryptophan Emission |
44.00 |
|
86-981 |
25 |
357.00 |
Tryptophan Emission |
44.00 |
|
86-989 |
50 |
357.00 |
Tryptophan Emission |
44.00 |
|
86-974 |
12.5 |
370.00 |
Sirius Excitation |
36.00 |
|
86-982 |
25 |
370.00 |
Sirius Excitation |
36.00 |
|
86-990 |
50 |
370.00 |
Sirius Excitation |
36.00 |
|
84-077 |
12.5 |
377.00 |
DAPI Excitation |
50.00 |
|
84-093 |
25 |
377.00 |
DAPI Excitation |
50.00 |
|
84-109 |
50 |
377.00 |
DAPI Excitation |
50.00 |
|
33-320 |
12.5 |
386.00 |
DAPI Excitation |
23.00 |
|
33-321 |
25 |
386.00 |
DAPI Excitation |
23.00 |
|
33-322 |
50 |
386.00 |
DAPI Excitation |
23.00 |
|
84-078 |
12.5 |
387.00 |
DAPI Excitation / BFP & GFP Excitation |
11.00 |
|
84-094 |
25 |
387.00 |
DAPI Excitation / BFP & GFP Excitation |
11.00 |
|
84-110 |
50 |
387.00 |
DAPI Excitation / BFP & GFP Excitation |
11.00 |
|
86-337 |
12.5 |
390.00 |
405nm Laser Excitation |
40.00 |
|
86-348 |
25 |
390.00 |
405nm Laser Excitation |
40.00 |
|
86-359 |
50 |
390.00 |
405nm Laser Excitation |
40.00 |
|
86-338 |
12.5 |
435.00 |
Qdot® Excitation |
40.00 |
|
86-349 |
25 |
435.00 |
Qdot® Excitation |
40.00 |
|
86-360 |
50 |
435.00 |
Qdot® Excitation |
40.00 |
|
67-012 |
12.5 |
438.00 |
CFP Excitation |
24.00 |
|
67-026 |
25 |
438.00 |
CFP Excitation |
24.00 |
|
67-040 |
50 |
438.00 |
CFP Excitation |
24.00 |
|
86-339 |
12.5 |
440.00 |
Sirius Emission |
40.00 |
|
86-350 |
25 |
440.00 |
Sirius Emission |
40.00 |
|
86-361 |
50 |
440.00 |
Sirius Emission |
40.00 |
|
84-079 |
12.5 |
447.00 |
DAPI Emission / BFP & GFP Emission |
60.00 |
|
84-095 |
25 |
447.00 |
DAPI Emission / BFP & GFP Emission |
60.00 |
|
84-111 |
50 |
447.00 |
DAPI Emission / BFP & GFP Emission |
60.00 |
|
86-975 |
12.5 |
448.00 |
442nm Laser Excitation |
20.00 |
|
86-983 |
25 |
448.00 |
442nm Laser Excitation |
20.00 |
|
86-991 |
50 |
448.00 |
442nm Laser Excitation |
20.00 |
|
86-340 |
12.5 |
452.00 |
DiA Excitation |
45.00 |
|
86-351 |
25 |
452.00 |
DiA Excitation |
45.00 |
|
86-362 |
50 |
452.00 |
DiA Excitation |
45.00 |
|
86-341 |
12.5 |
466.00 |
GFP Excitation |
40.00 |
|
86-352 |
25 |
466.00 |
GFP Excitation |
40.00 |
|
86-363 |
50 |
466.00 |
GFP Excitation |
40.00 |
|
67-013 |
12.5 |
472.00 |
GFP Excitation |
30.00 |
|
67-027 |
25 |
472.00 |
GFP Excitation |
30.00 |
|
67-041 |
50 |
472.00 |
GFP Excitation |
30.00 |
|
86-342 |
12.5 |
475.00 |
FITC Excitation |
50.00 |
|
86-353 |
25 |
475.00 |
FITC Excitation |
50.00 |
|
86-364 |
50 |
475.00 |
FITC Excitation |
50.00 |
|
67-014 |
12.5 |
482.50 |
FITC Excitation / CFP Emission |
31.00 |
|
67-028 |
25 |
482.50 |
FITC Excitation / CFP Emission |
31.00 |
|
67-042 |
50 |
482.50 |
FITC Excitation / CFP Emission |
31.00 |
|
84-080 |
12.5 |
494.00 |
SpectrumGreen™ Excitation |
20.00 |
|
84-096 |
25 |
494.00 |
SpectrumGreen™ Excitation |
20.00 |
|
84-112 |
50 |
494.00 |
SpectrumGreen™ Excitation |
20.00 |
|
67-015 |
12.5 |
500.00 |
YFP Excitation |
24.00 |
|
67-029 |
25 |
500.00 |
YFP Excitation |
24.00 |
|
67-043 |
50 |
500.00 |
YFP Excitation |
24.00 |
|
87-734 |
12.5 |
510.00 |
Cy2 Emission / Cy3 Excitation |
20.00 |
|
87-748 |
25 |
510.00 |
Cy2 Emission / Cy3 Excitation |
20.00 |
|
87-762 |
50 |
510.00 |
Cy2 Emission / Cy3 Excitation |
20.00 |
|
84-081 |
12.5 |
510.00 |
FURA2 Emission |
84.00 |
|
84-097 |
25 |
510.00 |
FURA2 Emission |
84.00 |
|
84-113 |
50 |
510.00 |
FURA2 Emission |
84.00 |
|
33-323 |
12.5 |
512.00 |
Fluorescein Emission |
25.00 |
|
33-324 |
25 |
512.00 |
Fluorescein Emission |
25.00 |
|
33-325 |
50 |
512.00 |
Fluorescein Emission |
25.00 |
|
67-016 |
12.5 |
520.00 |
GFP Emission |
36.00 |
|
67-030 |
25 |
520.00 |
GFP Emission |
36.00 |
|
67-044 |
50 |
520.00 |
GFP Emission |
36.00 |
|
87-735 |
12.5 |
520.00 |
Alexa Fluor® 488 Emission / GFP Emission |
70.00 |
|
87-749 |
25 |
520.00 |
Alexa Fluor® 488 Emission / GFP Emission |
70.00 |
|
87-763 |
50 |
520.00 |
Alexa Fluor® 488 Emission / GFP Emission |
70.00 |
|
86-343 |
12.5 |
525.00 |
Qdot® 525 Emission |
15.00 |
|
86-354 |
25 |
525.00 |
Qdot® 525 Emission |
15.00 |
|
86-365 |
50 |
525.00 |
Qdot® 525 Emission |
15.00 |
|
86-976 |
12.5 |
525.00 |
GPF/FITC Emission |
45.00 |
|
86-984 |
25 |
525.00 |
GPF/FITC Emission |
45.00 |
|
86-992 |
50 |
525.00 |
GPF/FITC Emission |
45.00 |
|
84-082 |
12.5 |
527.00 |
SpectrumGreen™ Emission |
20.00 |
|
84-098 |
25 |
527.00 |
SpectrumGreen™ Emission |
20.00 |
|
84-114 |
50 |
527.00 |
SpectrumGreen™ Emission |
20.00 |
|
87-736 |
12.5 |
530.00 |
Alexa Fluor® 532 Excitation / Thiazole Orange Emission |
55.00 |
|
87-750 |
25 |
530.00 |
Alexa Fluor® 532 Excitation / Thiazole Orange Emission |
55.00 |
|
87-764 |
50 |
530.00 |
Alexa Fluor® 532 Excitation / Thiazole Orange Emission |
55.00 |
|
84-083 |
12.5 |
534.00 |
SpectrumGold™ Excitation |
20.00 |
|
84-099 |
25 |
534.00 |
SpectrumGold™ Excitation |
20.00 |
|
84-115 |
50 |
534.00 |
SpectrumGold™ Excitation |
20.00 |
|
67-017 |
12.5 |
534.50 |
Cy3 Excitation / FITC Emission |
43.00 |
|
67-031 |
25 |
534.50 |
Cy3 Excitation / FITC Emission |
43.00 |
|
67-045 |
50 |
534.50 |
Cy3 Excitation / FITC Emission |
43.00 |
|
86-344 |
12.5 |
540.00 |
FITC Emission |
50.00 |
|
86-355 |
25 |
540.00 |
FITC Emission |
50.00 |
|
86-366 |
50 |
540.00 |
FITC Emission |
50.00 |
|
67-018 |
12.5 |
543.00 |
YFP Emission / TRITC Excitation |
22.00 |
|
67-032 |
25 |
543.00 |
YFP Emission / TRITC Excitation |
22.00 |
|
67-046 |
50 |
543.00 |
YFP Emission / TRITC Excitation |
22.00 |
|
87-737 |
12.5 |
549.00 |
Alexa Fluor® 532 Emission / DyLight™ Excitation |
15.00 |
|
87-751 |
25 |
549.00 |
Alexa Fluor® 532 Emission / DyLight™ Excitation |
15.00 |
|
87-765 |
50 |
549.00 |
Alexa Fluor® 532 Emission / DyLight™ Excitation |
15.00 |
|
33-329 |
12.5 |
550.00 |
Broadband Green Fluorescence |
93.00 |
|
33-330 |
25 |
550.00 |
Broadband Green Fluorescence |
93.00 |
|
33-331 |
50 |
550.00 |
Broadband Green Fluorescence |
93.00 |
|
86-977 |
12.5 |
560.00 |
561nm Laser Emission |
25.00 |
|
86-985 |
25 |
560.00 |
561nm Laser Emission |
25.00 |
|
86-993 |
50 |
560.00 |
561nm Laser Emission |
25.00 |
|
86-978 |
12.5 |
561.00 |
Keima Red Excitation |
14.00 |
|
86-986 |
25 |
561.00 |
Keima Red Excitation |
14.00 |
|
86-994 |
50 |
561.00 |
Keima Red Excitation |
14.00 |
|
67-019 |
12.5 |
562.00 |
Texas Red Excitation / mCherry Excitation |
40.00 |
|
67-033 |
25 |
562.00 |
Texas Red Excitation / mCherry Excitation |
40.00 |
|
67-047 |
50 |
562.00 |
Texas Red Excitation / mCherry Excitation |
40.00 |
|
84-084 |
12.5 |
572.00 |
SpectrumGold™ Emission |
28.00 |
|
84-100 |
25 |
572.00 |
SpectrumGold™ Emission |
28.00 |
|
84-116 |
50 |
572.00 |
SpectrumGold™ Emission |
28.00 |
|
33-332 |
12.5 |
575.00 |
Alexa Fluor® 568 Excitation |
27.00 |
|
33-333 |
25 |
575.00 |
Alexa Fluor® 568 Excitation |
27.00 |
|
33-334 |
50 |
575.00 |
Alexa Fluor® 568 Excitation |
27.00 |
|
87-738 |
12.5 |
578.00 |
Alexa Fluor® 568 Excitation / Cy3.5 Emission |
16.00 |
|
87-752 |
25 |
578.00 |
Alexa Fluor® 568 Excitation / Cy3.5 Emission |
16.00 |
|
87-766 |
50 |
578.00 |
Alexa Fluor® 568 Excitation / Cy3.5 Emission |
16.00 |
|
33-906 |
12.5 |
585.00 |
36.00 | |
|
33-907 |
25 |
585.00 |
36.00 | |
|
33-908 |
50 |
585.00 |
36.00 | |
|
84-085 |
12.5 |
586.00 |
SpectrumOrange™ Emission / SpectrumRed™ Excitation |
20.00 |
|
84-101 |
25 |
586.00 |
SpectrumOrange™ Emission / SpectrumRed™ Excitation |
20.00 |
|
84-117 |
50 |
586.00 |
SpectrumOrange™ Emission / SpectrumRed™ Excitation |
20.00 |
|
67-020 |
12.5 |
591.50 |
Cy3 Emission / TRITC Emission |
43.00 |
|
67-034 |
25 |
591.50 |
Cy3 Emission / TRITC Emission |
43.00 |
|
67-048 |
50 |
591.50 |
Cy3 Emission / TRITC Emission |
43.00 |
|
86-345 |
12.5 |
605.00 |
Qdot® 605 Emission |
15.00 |
|
86-356 |
25 |
605.00 |
Qdot® 605 Emission |
15.00 |
|
86-367 |
50 |
605.00 |
Qdot® 605 Emission |
15.00 |
|
84-086 |
12.5 |
607.00 |
GFP Emission / RFP Emission |
36.00 |
|
84-102 |
25 |
607.00 |
GFP Emission / RFP Emission |
36.00 |
|
84-118 |
50 |
607.00 |
GFP Emission / RFP Emission |
36.00 |
|
87-739 |
12.5 |
615.00 |
Alexa Fluor® 594 Emission / Cy3 Emission |
20.00 |
|
87-753 |
25 |
615.00 |
Alexa Fluor® 594 Emission / Cy3™ Emission |
20.00 |
|
87-767 |
50 |
615.00 |
Alexa Fluor® 594 Emission / Cy3™ Emission |
20.00 |
|
33-909 |
12.5 |
620.00 |
56.00 | |
|
33-910 |
25 |
620.00 |
56.00 | |
|
33-911 |
50 |
620.00 |
56.00 | |
|
87-740 |
12.5 |
623.00 |
Cy5 Excitation / Texas Red® Emission |
24.00 |
|
87-754 |
25 |
623.00 |
Cy5 Excitation / Texas Red® Emission |
24.00 |
|
87-768 |
50 |
623.00 |
Cy5 Excitation / Texas Red® Emission |
24.00 |
|
67-021 |
12.5 |
624.00 |
Texas Red Emission / Cy5 Excitation |
40.00 |
|
67-035 |
25 |
624.00 |
Texas Red Emission / Cy5 Excitation |
40.00 |
|
67-049 |
50 |
624.00 |
Texas Red Emission / Cy5 Excitation |
40.00 |
|
86-346 |
12.5 |
625.00 |
Qdot® 625 Emission |
15.00 |
|
86-357 |
25 |
625.00 |
Qdot® 625 Emission |
15.00 |
|
86-368 |
50 |
625.00 |
Qdot® 625 Emission |
15.00 |
|
84-087 |
12.5 |
628.00 |
SpectrumRed™ Emission / Cy5 Excitation |
32.00 |
|
84-103 |
25 |
628.00 |
SpectrumRed™ Emission / Cy5 Excitation |
32.00 |
|
84-119 |
50 |
628.00 |
SpectrumRed™ Emission / Cy5 Excitation |
32.00 |
|
33-326 |
12.5 |
631.00 |
Alexa Fluor® 633 Excitation |
21.00 |
|
33-327 |
25 |
631.00 |
Alexa Fluor® 633 Excitation |
21.00 |
|
33-328 |
50 |
631.00 |
Alexa Fluor® 633 Excitation |
21.00 |
|
86-979 |
12.5 |
640.00 |
635nm Laser Excitation |
14.00 |
|
86-987 |
25 |
640.00 |
635nm Laser Excitation |
14.00 |
|
86-995 |
50 |
640.00 |
635nm Laser Excitation |
14.00 |
|
67-022 |
12.5 |
640.50 |
mCherry Emission |
75.00 |
|
67-036 |
25 |
640.50 |
mcherry Emission |
75.00 |
|
67-050 |
50 |
640.50 |
mCherry Emission |
75.00 |
|
33-335 |
12.5 |
648.00 |
FITC Emission |
14.00 |
|
33-336 |
25 |
648.00 |
FITC Emission |
14.00 |
|
33-337 |
50 |
648.00 |
FITC Emission |
14.00 |
|
86-347 |
12.5 |
655.00 |
Qdot® 655 Emission |
15.00 |
|
86-358 |
25 |
655.00 |
Qdot® 655 Emission |
15.00 |
|
86-369 |
50 |
655.00 |
Qdot® 655 Emission |
15.00 |
|
67-023 |
12.5 |
655.00 |
Cy5.5 Excitation |
40.00 |
|
67-037 |
25 |
655.00 |
Cy5.5 Excitation |
40.00 |
|
67-051 |
50 |
655.00 |
Cy5.5 Excitation |
40.00 |
|
87-741 |
12.5 |
661.00 |
Alexa Fluor®647 Excitation / TO-PRO®-3 Iodide Emission |
20.00 |
|
87-755 |
25 |
661.00 |
Alexa Fluor®647 Excitation / TO-PRO®-3 Iodide Emission |
20.00 |
|
87-769 |
50 |
661.00 |
Alexa Fluor®647 Excitation / TO-PRO®-3 Iodide Emission |
20.00 |
|
86-980 |
12.5 |
676.00 |
Cy5 Emission |
29.00 |
|
86-988 |
25 |
676.00 |
Cy5 Emission |
29.00 |
|
86-996 |
50 |
676.00 |
Cy5 Emission |
29.00 |
|
67-024 |
12.5 |
692.00 |
Cy5 Emission |
40.00 |
|
67-038 |
25 |
692.00 |
Cy5 Emission |
40.00 |
|
67-052 |
50 |
692.00 |
Cy5 Emission |
40.00 |
|
87-743 |
12.5 |
697.00 |
Alexa Fluor® 680 Emission / Cy5.5™ Emission |
75.00 |
|
87-757 |
25 |
697.00 |
Alexa Fluor® 680 Emission / Cy5.5™ Emission |
75.00 |
|
87-771 |
50 |
697.00 |
Alexa Fluor® 680 Emission / Cy5.5™ Emission |
75.00 |
|
84-088 |
12.5 |
710.00 |
Cy7 Excitation |
40.00 |
|
84-104 |
25 |
710.00 |
Cy7 Excitation |
40.00 |
|
84-120 |
50 |
710.00 |
Cy7 Excitation |
40.00 |
|
67-025 |
12.5 |
716.00 |
Cy5 Emission |
40.00 |
|
67-039 |
25 |
716.00 |
Cy5 Emission |
40.00 |
|
67-053 |
50 |
716.00 |
Cy5 Emission |
40.00 |
|
87-744 |
12.5 |
732.00 |
Cy7 Excitation / DY-732 Excitation |
68.00 |
|
87-758 |
25 |
732.00 |
Cy7 Excitation / DY-732 Excitation |
68.00 |
|
87-772 |
50 |
732.00 |
Cy7 Excitation / DY-732 Excitation |
68.00 |
|
84-089 |
12.5 |
769.00 |
ICG-A Excitation |
41.00 |
|
84-105 |
25 |
769.00 |
ICG-A Excitation |
41.00 |
|
84-121 |
50 |
769.00 |
ICG-A Excitation |
41.00 |
|
84-090 |
12.5 |
775.00 |
Cy7 Emission |
46.00 |
|
84-106 |
25 |
775.00 |
Cy7 Excitation |
46.00 |
|
84-122 |
50 |
775.00 |
Cy7 Excitation |
46.00 |
|
87-745 |
12.5 |
785.00 |
Alexa Fluor® 790 Excitation / IRDye 800RS Emission |
62.00 |
|
87-759 |
25 |
785.00 |
Alexa Fluor® 790 Excitation / IRDye 800RS Emission |
62.00 |
|
87-773 |
50 |
785.00 |
Alexa Fluor® 790 Excitation / IRDye 800RS Emission |
62.00 |
|
84-091 |
12.5 |
832.00 |
ICG-A Excitation |
37.00 |
|
84-107 |
25 |
832.00 |
ICG-A Excitation |
37.00 |
|
84-123 |
50 |
832.00 |
ICG-A Excitation |
37.00 |
