Проточная цитометрия: точное измерение мощности, стабильности и профиля пучка лазера детекторами Gentec-EO
Развитие лазерных технологий внесло значительный вклад в развитие проточных цитометров и сортировщиков. Благодаря разработке более компактных лазеров с требуемой выходной мощностью и стабильностью медицинское оборудование также уменьшило свои размеры. Знание параметров лазера и того, как они влияют на флуоресценцию и общую точность, помогает обеспечить оптимальную производительность цитометрического оборудования. Поэтому важно точно определить параметры лазерного пучка.
Какие характеристики лазера наиболее важны для проточной цитометрии?
Стабильность и профиль пучка
Наиболее важным параметром является профиль пучка. Хотя пучок симметричен, его наибольшая интенсивность находится в центре, а на краях подает. Это соответствует Гауссову (нормальному) распределению. Поскольку большая часть этой энергии находится в центре пучка, необходимо, чтобы образцы клеток проходили через эту область, чтобы генерировать наибольшую флуоресценцию.
Клетки, которые проходят через край пучка, где низкая мощность, подвергаются воздействию меньшего количества фотонов и, следовательно, генерируется меньше флуоресценции, что способствуют неточным показаниям.
Поскольку большинство клеток в проточной цитометрии имеют диаметр менее 20 мкм, размер пятна и распределение мощности по ширине луча (профилю) должны быть как можно более малыми и точными. Для достижения такого уровня точности крайне важна последовательная калибровка и измерение с использованием правильного измерительного оборудования.
Мощность
Еще один важный параметр лазерного пучка - фактическая выходная мощность (обычно измеряется в милливаттах). Эта характеристика, которую можно регулировать на некоторых цитометрах, является просто мерой того, сколько фотонов высвобождается из лазера в единицу времени.
Поскольку проточная цитометрия в значительной степени измеряет флуоресценцию, чем больше фотонов попадет на клетки, тем выше будет полезное считывание. Обычно лазеры для проточной цитометрии имеют мощность 20 МВт до 100 МВт, хотя некоторые устройства предназначены более высоких уровней мощности.
Как характеризуются лазеры для цитометрии?
Проточная цитометрия является одним из самых требовательных приложений в отношении точности параметров лазера. Поэтому характеристики вашего лазера: профиль пучка, мощность и общая стабильность, должны соответствовать строгим техническим требованиям для достижения хорошего результата измерений.
Надежный профилометр отличается тем, что измеряет пространственное распределение мощности по диаметру пучка. Он особенно важен, когда речь идет об обнаружении клеток размером порядка микрон. А соответствующий детектор мощности должен быть выбран исходя из вашего применения. Правильный детектор мощности также должен использоваться для обеспечения того, чтобы выход фотонов соответствовал требованиям вашего приложения.
Таким образом, параметры лазерного пучка должны быть в приоритете при работе с клетками. Обязательно измеряйте и регулярно калибруйте лазер с помощью профилометра и детектора мощности, чтобы свести к минимуму дорогостоящие ошибки из-за неточного считывания.